PI3 K/Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用
Roles of PI3K/Akt signaling pathway in regulating bone mesenchymal stem cells proliferation and differentiation
目的:研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞( mesenchymal stem cells , MSCs)增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞( hMSCs),加入PI3K抑制剂LY294002(1、10μmol/L),应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7 d,采用碱性磷酸酶( ALP)染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析, Western blot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、 Runx2、 OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72 h, LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强( P<0.05)。 ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组( P<0.05)。成骨诱导培养3和7 d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组( P<0.05)。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7 d也显著高于1μmol/L组( P<0.05)。 Western blot 检测结果证实成骨诱导可激活 Akt 磷酸化蛋白表达,但 LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7 d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、 Runx2、 OPN、 Osterix 4种基因mRNA表达(均P<0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。 PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。
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